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通常我們在做抗體純化實驗時，都會用到親和填料，親和填料特異性極強，分辨率高，選擇合適的親和填料對分離抗體至關重要。那么我們科研和生產中又該怎么去選擇呢？以下有小編分享的選擇思路：

Protein A有耐堿形式的突變體，它更加穩定，脫落更少。因此，在protein A可以結合的情況下，它的一些純化性質比protein G/L更加清楚，先選protein A親和填料。選擇protein A親和填料，需要配套選擇pH8.5-9.0的結合緩沖液，實現更好的結合。

羊抗體和protein A結合性質不好，小鼠的IgG1和proteinA結合也不好，此時可以選擇protein G，人的抗體和protein A/G結合都不錯，但考慮到鹽濃度，pH梯度等影響，選擇protein G操作更簡單，方便，只要使用PBS對樣品進行一定程度的稀釋，就可以很好的和protein G親和填料結合。

在protein A/G的結合效果都不好的時候，protein L是一個很好的補充，它結合抗體的kappa輕鏈。對于多抗來說，需要判斷kappa和lamda輕鏈的比例，如果lamda輕鏈的比例占優勢，使用protein L純化，將損失較多的目的抗體。對于單抗來說，如果不管是鼠抗，還是兔抗，kappa鏈都占有優勢，可以嘗試protein L純化。這種填料純化的純度也很不錯，但是請注意的是：kappa輕鏈也有多種亞型，并不是每一種都可以和protein L結合。

有一些單抗，對于protein A/G/L的結合都不好，在優化了pH、鹽濃度之后，還是解決不了問題。此時可以嘗試親硫膠純化（thiophilicresin）。這種填料和抗體之間的結合并不是十分特異，基本上通過緩沖液中的硫酸根的僑聯作用和目標分子上的巰基發生作用。要提高純度的話，推薦使用鹽的梯度洗脫（硫酸鹽從500 mM逐漸降低）。這種填料的優勢在于，洗脫條件非常溫和（可以PBS洗脫），對于不穩定的抗體來說，有重要價值。

以上這些抗體純化填料，并不能區別特異性抗體與非特異性抗體。要獲得特異性較高的抗體，可以使用抗原親和柱。常規能夠偶聯抗原的填料包括：氨基活化填料、羧基活化填料、醛基活化填料、NHS活化填料、碘乙酸活化填料等，經典的溴化氰活化填料偶聯速度快，載量高，受到歡迎。但要注意：溴化氰活化填料穩定性較差，容易造成抗原脫落，并不是較好的選擇。