背景介紹
堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AP)是一種膜結合糖蛋白，分子量約140KDa。AP在自然界中廣泛分布，包括原核生物和更高的真核生物。其活性位點中包括兩個鋅離子和一個鎂離子，這三個位點的金屬離子對于酶活性至關重要。堿性磷酸酶可以水解各種單磷酸酯，并釋放無機磷酸鹽。1,2-二氧雜環丁烷化合物AMPPD作為一種超靈敏的堿性磷酸酶底物，在堿性磷酸酶的催化作用下，磷酸根基團水解，形成一個不穩定的中間體，自行分解后四元環斷裂釋放出大量能量，從而激發化學發光反應。因此磁珠-抗體偶聯物與堿性磷酸酶-抗體偶聯物在化學發光試劑盒中可作為固相捕獲試劑和酶標試劑用于檢測血清中的痕量抗原。與辣根過氧化物酶(HRP)相比，堿性磷酸酶具有穩定性和高敏感性的優勢。AP在生物學尤其是分子生物學和免疫學領域有著廣泛的應用。
隨著酶促化學發光檢測技術的發展，酶偶聯抗體及其偶聯方法受到廣泛關注。目前常用的堿性磷酸酶偶聯方法有過碘酸鈉氧化法、碳二亞胺法和SMCC異性雙功能偶聯法等。過碘酸鈉氧化法是先將酶進行醛基化，然后和抗體偶聯，這種操作比較復雜，偶聯產物有效活性濃度低。碳二亞胺法利用碳二亞胺類物質對蛋白質進行羧基化，這種方法容易形成蛋白分子間的自身聚合，產生非均一性產物。SMCC異性雙功能偶聯法利用SMCC的異性官能團，分別連接堿性磷酸酶和抗體，這種方法相比過碘酸鈉法和碳二亞胺法偶聯效率高。
西寶生物提供高質量的AP原料，性能穩定、活性高，精準助力免疫診斷試劑產品的開發，受到國內外廣大客戶朋友的肯定與支持。
表1 AP酶參數
參數 | R***酶對照 | 西寶DCE0108K酶 |
保存條件 | 2-8℃ | 2-8℃ |
規格 | 20±1mg/mL | 20±1mg/mL |
比活性 | ＞7000U/mg | ＞7000U/mg |
穩定性 | 45℃ | 45℃ |
糖基化 | ≤7% | ≤7% |
來源 | 重組 | 重組 |
純度 | ＞95% | ＞95% |
性能對比
2.1 直接測試酶活
2.1.1實驗步驟
a）分別選擇一批次R***AP酶及西寶DCE0108K酶，根據其標識濃度分別配制成表2的6個濃度；
b）將配制好的酶結合物每孔10uL加入包被的發光板中，每個濃度3次重復；
c）向b）中分別加入100uL AMPPD發光底物，在酶標儀上測試發光值。
b）將配制好的酶結合物每孔10uL加入包被的發光板中，每個濃度3次重復；
c）向b）中分別加入100uL AMPPD發光底物，在酶標儀上測試發光值。
2.1.2 實驗結果
當AP濃度介于濃度1-濃度6時，兩者的發光值均值偏差在±20%范圍內，表明西寶AP-01酶與R***AP酶測試性能相當。
表2 AP酶活比對（直接測試）
AP酶濃度 | R***發光值均值 | 西寶DCE0108K酶發光值均值 | 西寶與R*** 偏差 |
濃度6 | 1572599 | 1605305 | 2.1% |
濃度5 | 1311183 | 1530485 | 16.7% |
濃度4 | 131399 | 147823 | 12.5% |
濃度3 | 10433 | 10318 | -1.1% |
濃度2 | 1096 | 1040 | -5.1% |
濃度1 | 613 | 841 | 37.1% |
0 | 333 | / | |
2.2 標記抗體測試酶活（SMCC偶聯法）
2.2.1實驗步驟
a) 抗體1包被；
b) R***酶及西寶DCE0108K酶分別標記抗體2（SMCC偶聯法）；
c）配置7個濃度校準品；
d）加樣，每個濃度3次重復，孵育及洗滌；
e）在洗滌完成的板中分別加入100uL AMPPD發光底物，在酶標儀上測試發光值。
b) R***酶及西寶DCE0108K酶分別標記抗體2（SMCC偶聯法）；
c）配置7個濃度校準品；
d）加樣，每個濃度3次重復，孵育及洗滌；
e）在洗滌完成的板中分別加入100uL AMPPD發光底物，在酶標儀上測試發光值。
2.2.2 實驗結果
表3 AP酶活比對（標記測試）
校準品 | R***發光值均值 | 西寶AP-01發光值均值 | 西寶與R***酶偏差 |
校準品7 | 1187535 | 1402472 | 18.1% |
校準品6 | 1034131 | 1197433 | 15.8% |
校準品5 | 743609 | 892830 | 20.1% |
校準品4 | 138820 | 186484 | 34.3% |
校準品3 | 17832 | 22757 | 27.6% |
校準品2 | 2740 | 3663 | 33.7% |
校準品1 | 606 | 823 | 35.8% |
0 | 450 | / | |
當AP濃度介于校準品1-校準品7時，西寶DCE0108K酶測試發光值均高于R***AP酶發光值。這表明，在標記抗體時，西寶DCE0108K酶性能優于R酶。
西寶生物堿性磷酸酶的靈敏度、重復性以及穩定性性能優越可替代進口產品，為體外診斷IVD研發生產企業降本賦能。
產品訂購信息：
產品名稱 | 貨號 | 推薦應用 |
堿性磷酸酶ALP | DCE0108K | Specific activity : ≥7,000 U/mg |
Alkaline Phosphatase, EIA Grade | 10556602103 | Specific activity (+37°C, 4-NPP): ≥3,000 U/mg |
Alkaline Phosphatase, recombinant, highly active | 03137031103 | Specific activity (+37°C, 4-NPP): ≥7,000 U/mg |
背景介紹
堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase ,AP)是一種膜結合糖蛋白，分子量約140KDa。AP在自然界中廣泛分布，包括原核生物和更高的真核生物。其活性位點中包括兩個鋅離子和一個鎂離子，這三個位點的金屬離子對于酶活性至關重要。堿性磷酸酶可以水解各種單磷酸酯，并釋放無機磷酸鹽。1,2-二氧雜環丁烷化合物AMPPD作為一種超靈敏的堿性磷酸酶底物，在堿性磷酸酶的催化作用下，磷酸根基團水解，形成一個不穩定的中間體，自行分解后四元環斷裂釋放出大量能量，從而激發化學發光反應。因此磁珠-抗體偶聯物與堿性磷酸酶-抗體偶聯物在化學發光試劑盒中可作為固相捕獲試劑和酶標試劑用于檢測血清中的痕量抗原。與辣根過氧化物酶(HRP)相比，堿性磷酸酶具有穩定性和高敏感性的優勢。AP在生物學尤其是分子生物學和免疫學領域有著廣泛的應用。
隨著酶促化學發光檢測技術的發展，酶偶聯抗體及其偶聯方法受到廣泛關注。目前常用的堿性磷酸酶偶聯方法有過碘酸鈉氧化法、碳二亞胺法和SMCC異性雙功能偶聯法等。過碘酸鈉氧化法是先將酶進行醛基化，然后和抗體偶聯，這種操作比較復雜，偶聯產物有效活性濃度低。碳二亞胺法利用碳二亞胺類物質對蛋白質進行羧基化，這種方法容易形成蛋白分子間的自身聚合，產生非均一性產物。SMCC異性雙功能偶聯法利用SMCC的異性官能團，分別連接堿性磷酸酶和抗體，這種方法相比過碘酸鈉法和碳二亞胺法偶聯效率高。
西寶生物提供高質量的AP原料，性能穩定、活性高，精準助力免疫診斷試劑產品的開發，受到國內外廣大客戶朋友的肯定與支持。
表1 AP酶參數
參數 | R***酶對照 | 西寶DCE0108K酶 |
保存條件 | 2-8℃ | 2-8℃ |
規格 | 20±1mg/mL | 20±1mg/mL |
比活性 | ＞7000U/mg | ＞7000U/mg |
穩定性 | 45℃ | 45℃ |
糖基化 | ≤7% | ≤7% |
來源 | 重組 | 重組 |
純度 | ＞95% | ＞95% |
性能對比
2.1 直接測試酶活
2.1.1實驗步驟
a）分別選擇一批次R***AP酶及西寶DCE0108K酶，根據其標識濃度分別配制成表2的6個濃度；
b）將配制好的酶結合物每孔10uL加入包被的發光板中，每個濃度3次重復；
c）向b）中分別加入100uL AMPPD發光底物，在酶標儀上測試發光值。
b）將配制好的酶結合物每孔10uL加入包被的發光板中，每個濃度3次重復；
c）向b）中分別加入100uL AMPPD發光底物，在酶標儀上測試發光值。
2.1.2 實驗結果
當AP濃度介于濃度1-濃度6時，兩者的發光值均值偏差在±20%范圍內，表明西寶AP-01酶與R***AP酶測試性能相當。
表2 AP酶活比對（直接測試）
AP酶濃度 | R***發光值均值 | 西寶DCE0108K酶發光值均值 | 西寶與R*** 偏差 |
濃度6 | 1572599 | 1605305 | 2.1% |
濃度5 | 1311183 | 1530485 | 16.7% |
濃度4 | 131399 | 147823 | 12.5% |
濃度3 | 10433 | 10318 | -1.1% |
濃度2 | 1096 | 1040 | -5.1% |
濃度1 | 613 | 841 | 37.1% |
0 | 333 | / | |
2.2 標記抗體測試酶活（SMCC偶聯法）
2.2.1實驗步驟
a) 抗體1包被；
b) R***及西寶DCE0108K酶分別標記抗體2（SMCC偶聯法）；
c）配置7個濃度校準品；
d）加樣，每個濃度3次重復，孵育及洗滌；
e）在洗滌完成的板中分別加入100uL AMPPD發光底物，在酶標儀上測試發光值。
b) R***及西寶DCE0108K酶分別標記抗體2（SMCC偶聯法）；
c）配置7個濃度校準品；
d）加樣，每個濃度3次重復，孵育及洗滌；
e）在洗滌完成的板中分別加入100uL AMPPD發光底物，在酶標儀上測試發光值。
2.2.2 實驗結果
表3 AP酶活比對（標記測試）
校準品 | R***發光值均值 | 西寶AP-01發光值均值 | 西寶與R***偏差 |
校準品7 | 1187535 | 1402472 | 18.1% |
校準品6 | 1034131 | 1197433 | 15.8% |
校準品5 | 743609 | 892830 | 20.1% |
校準品4 | 138820 | 186484 | 34.3% |
校準品3 | 17832 | 22757 | 27.6% |
校準品2 | 2740 | 3663 | 33.7% |
校準品1 | 606 | 823 | 35.8% |
0 | 450 | / | |
當AP濃度介于校準品1-校準品7時，西寶DCE0108K酶測試發光值均高于R***AP酶發光值。這表明，在標記抗體時，西寶DCE0108K酶性能優于R酶。
西寶生物堿性磷酸酶的靈敏度、重復性以及穩定性性能優越可替代進口產品，為體外診斷IVD研發生產企業降本賦能。
產品訂購信息：
產品名稱 | 貨號 | 推薦應用 |
堿性磷酸酶ALP | DCE0108K | Specific activity : ≥7,000 U/mg |
Alkaline Phosphatase, EIA Grade | 10556602103 | Specific activity (+37°C, 4-NPP): ≥3,000 U/mg |
Alkaline Phosphatase, recombinant, highly active | 03137031103 | Specific activity (+37°CC, 4-NPP): ≥7,000 U/mg |
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